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流式細(xì)胞術(shù)做為一種快速的細(xì)胞定量分析技術(shù)，能夠同時(shí)對(duì)單個(gè)細(xì)胞進(jìn)行多種特征參數(shù)的檢測(cè)，如細(xì)胞大小、DNA含量、蛋白質(zhì)表達(dá)等，現(xiàn)已成為科研領(lǐng)域中不可或缺的重要工具。
流式檢測(cè)能順利進(jìn)行的硬要求之一是，樣本必須能在鞘液中流動(dòng)，因此，無論是培養(yǎng)的細(xì)胞，還是從各種組織中提取出來的細(xì)胞，都需要把待測(cè)樣本制備成單細(xì)胞懸液!制備欠妥的樣本，不僅會(huì)直接影響實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性和結(jié)果的可靠性，一些大的細(xì)胞團(tuán)塊甚至?xí)氯毫飨到y(tǒng)而影響儀器的正常運(yùn)行。
實(shí)驗(yàn)過程
1、取脾臟
頸椎脫臼法處死小鼠;在解剖臺(tái)上固定小鼠，從底端小心剪開小鼠整個(gè)腹部皮膚，暴露出小鼠腹膜;剪開小鼠腹膜，暴露出脾臟，摘取，并充分去除上面的脂肪組織;將取下的脾臟剪碎，置于預(yù)冷的PBS中浸泡待用
2、制備單細(xì)胞
使用凈信單細(xì)胞懸液制備儀，設(shè)置參數(shù)，點(diǎn)擊啟動(dòng)，程序結(jié)束后加入終止液
3、裂解紅細(xì)胞
在離心后的細(xì)胞懸液中加入ACK紅細(xì)胞裂解液，重懸細(xì)胞，在室溫裂解5min
4、過濾洗滌
通過過濾網(wǎng)過濾，將過濾后的細(xì)胞懸液收集至離心管中，離心5min，去除上清液
5、單細(xì)胞計(jì)數(shù)
顯微鏡觀察細(xì)胞，使用染色緩沖液重懸細(xì)胞調(diào)整細(xì)胞濃度，吸取細(xì)胞懸液至流式管中，準(zhǔn)備染色
結(jié)果分析：
小鼠脾臟活率99%，方便后續(xù)進(jìn)行流式分析。
注意事項(xiàng)：
1.組織盡量剪碎，消化效果更好
2.摘取脾臟后，盡可能移除黏連的脂肪組織，提高脾臟細(xì)胞的占比
3.建議使用新鮮配制的紅細(xì)胞裂解液
4.消化后的細(xì)胞應(yīng)洗滌干凈，否則影響流式效果
單細(xì)胞懸液制備儀不僅效率高、溫和，保護(hù)細(xì)胞活性，還精準(zhǔn)可控，適應(yīng)不同組織類型。高通量設(shè)計(jì)，提升實(shí)驗(yàn)效率，對(duì)于需要處理多個(gè)樣本的研究項(xiàng)目，單細(xì)胞懸液制備儀的高通量設(shè)計(jì)可以同時(shí)處理多個(gè)樣本，大幅縮短實(shí)驗(yàn)時(shí)間。選擇合適的儀器，可批量制備單細(xì)胞懸液，節(jié)約了實(shí)驗(yàn)時(shí)間，根據(jù)需求選擇儀器中人體、小鼠各個(gè)組織、器官對(duì)應(yīng)程序，提高了單細(xì)胞懸液制備的活率和得率，使后續(xù)實(shí)驗(yàn)進(jìn)行更加順利。
